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PCR扩增的反应条件

标准的PCR反应体系:10×扩增缓冲液 10ul4种dNTP混合物 各200umol/L引物 各10~100pmol模板DNA 0.1~2ugTaq DNA聚合酶 2.5uMg2+ 1.5mmol/L加双或三蒸水至 100ulPCR反应五要素: 参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+引物: ...

1、 温度与时间的设置: 基于PCR原理三步骤而设置变性-退火-延伸三个温度点。在标准反应中采用三温度点法,双链DNA在90~95℃变性,再迅速冷却至40 ~60℃,引物退火并结合到靶序列上,然后快速升温至70~75℃,在Taq DNA 聚合酶的作用下,使引物链...

特异性强 PCR反应的特异性决定因素为:①引物与模板DNA特异正确的结合;②碱基配对原则;③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;④靶基因的特异性与保守性。其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合...

PCR需要注意以下事项: 1.模板 尽量避免含有酶抑制剂! 2.引物 保存时间不易过长,要符合引物涉及的原则,在用软件设计结束后要进行适当的人工处理。引物浓度要合适,太高容易引起错配及非特异性产物的形成。 3.循环参数 一般退火温度应低于Tm值...

pcr扩增产物的特异性与哪些因素有关 PCR产物的电泳检测时间 一般为48h以内,有些最好于当日电泳检测,大于48h后带型不规则甚致消失. 假阴性,不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备,②引物的质量与特异性,③酶的质量及, ④PCR循环条件.寻...

模板DNA浓度主要看你的PCR扩增体系所使用的酶: 1、一般普通的酶,DNA模板量在50到100ng都可以扩增出来的 2、高效一点的酶,几ng也可以扩增出来的。 1、PCR反应步骤:类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。P...

pcr扩增所用的试剂: pcr扩增步骤: 1.细菌染色体DNA的提取(见上一组) 2.RAPD反应体系的配置(上图) 3·反应程序:将RAPD反应试剂加入EP管中 轻混后用100ul石蜡油覆盖于反应混合液之上,防止样品在反复加热-冷却的过程中蒸发,盖好盖子。 打...

PCR有两种解释: 1,最常用的理解:RT 是‘逆转录’(reverse transcription)的缩写 2,现在也有人这么用:RT是‘实时’(real time)的缩写 1,先说逆转录PCR: 这项技术使用的‘逆转录酶’来自逆转录病毒,是一种能按照碱基互补配对原则,以脱氧核...

试剂盒特长 1、适用于Real Time PCR反应,可以快速、准确地对目的基因进行定量检测。 2、在2×OneShine SybrGreen preMix中,预先混有SybrGreen,PCR体系配制时只需入模板、引物、ddH2O即可,操作方便快捷。 3、含有更耐高温并持续稳定的DNA Poly...

PCR都是以DNA为模板的,所谓RT-PCR 是逆转录PCR,顾名思义是在PCR反应前加了一步逆转录的过程。一般的PCR是已总DNA或质粒DNA为模板来进行的反应;而RT-PCR 是以提取的总RNA为模板(实际上是其中的mRNA),经逆转录反应转为与之互补的cDNA,再以...

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