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如何设计syBrgrEEn法荧光定量pCr引物

引物 荧光定量PCR 是利用荧光定量PCR 仪(如ABI 7500、stepone、ROChe LightCycler、Bio-Rad CFX96 等)通过实时追踪 PCR 每一步循环的荧光信号 值来达到对起始模板量的定量分析。一次成功的荧光定量 PCR 反应除了需要稳 定的仪器、优质的 Taq ...

(转载仅供参考) a) 针双标记探针引物探针设计规则 所选序列应该高度特异应该选择具二级结构扩增重要二级结构影响反应效率任何实应用期望获100%扩增反应效率意味着每循环体系内扩增都两倍增加二级结构热力比寡聚目基更稳定目基杂交失败二级结构...

是不是有可能因为目的基因的CT值过大,导致梯度稀释时CT值没有等比增加,所以扩增效率不好。

文献中的基因和你的目标基因序列相同,你可以用文献中的引物。否则要重新设计。

主要看你的CT值大约是多少,如果很大(大于40循环)那么可以判定结果没有问题,如果跟目的基因的CT一致或者为其他CT值那么判断为模板造成的气溶胶污染或者其他外缘DNA造成的污染。另外你阴性对照加的是水,那么说明你做梯度稀释的时候用的也是灭...

而不掺入链中的SYBR Green I染料分子荧光不变,加入过量SYBR Green I荧光染料。在PCR反应体系中博凌科为的SYBR Green I与dsDNA 结合荧光信号可增强800~1000倍,从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增,它特异性地掺入DNA双链后,荧光信号增强

作用类似于电泳,但是相对于电泳更灵敏,更清晰一些。 通过溶解曲线可以了解目的产物TM值,是否出现杂峰。一般溶解曲线的结果+电泳的结果和在一起相对比较准确。当然最后片段也可以测序最终确定目的产物。 主要的是:根据溶解曲线可以确定以下几...

本身就是荧光类的染料探针~见光易分解这是基本性质~

博凌科为的SYBR Green I与dsDNA 结合荧光信号可增强800~1000倍。在PCR反应体系中,加入过量SYBR Green I荧光染料,它特异性地掺入DNA双链后,荧光信号增强,而不掺入链中的SYBR Green I染料分子荧光不变,从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增。

你可以查阅一些关于EVA的文献。属于饱和染料,效果比SYBR好,但是现在没有普及,一般的定量实验用半饱和染料已经足够

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